具有提高了的蛋白质生产率的微生物及其利用的制作方法-凯发k8娱乐

本发明涉及一种具有提高了的蛋白质生产率的微生物。本发明还涉及一种使用上述微生物的蛋白质的制造方法。

背景技术：

1、芽孢杆菌属(bacillus)等的微生物由于具有能够大量分泌生产酶、能够进行超高密度培养、生长繁殖快、属于生物安全等级1(biosafetylevel1)的菌种较多、为革兰氏阳性菌、以及基因组尺寸较小(4m bp左右)等优点，因此在用于食品和医药品的物质的生产中具有优异的性能。芽孢杆菌属等的微生物例如用于生产α－淀粉酶、β－淀粉酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和纤维素酶等酶。另外，为了提高微生物的物质生产能力，研究了通过uv照射取得突变株、通过基因重组技术取得转化体等。

2、atp结合盒(atp binding cassette，abc)转运体是指具有显示出通用性高的氨基酸序列的承担atp水解酶活性的区域的膜贯通型蛋白质。abc转运体能够利用自身将atp水解得到的能量对化合物进行主动转运。

3、专利文献1中记载了abc转运体参与了弯孢霉属(curvularia)丝状菌生产的环状肽向细胞外的排出(段落0142)。专利文献2中记载了一种测定abc蛋白质的底物量的方法，并记载了优选卟啉类作为底物。专利文献3中记载了一种牛磺酸的有效制造方法，并记载了通过使tauabc蛋白质基因缺失来降低牛磺酸摄取体系的活性。

4、现有技术文献

5、专利文献

6、专利文献1：国际公开wo2018/128140号公报

7、专利文献2：日本特开2007－151493号公报

8、专利文献3：日本特开2019－129708号公报

技术实现思路

1、如上视述，虽然已经使用微生物来制造蛋白质，但仍然有必要开发增加蛋白质表达的方法。abc转运体是与低分子、肽的分泌相关的基因，但尚不知晓提高蛋白质分泌的情况。

2、本发明所要解决的课题在于提供一种提高蛋白质分泌量的微生物。本发明所要解决的又一课题在于提供使用上述微生物来制造蛋白质的方法。

3、本发明人等发现通过在解淀粉芽胞杆菌(bacillus amyloliquefaciens)的酶高产菌株中破坏abc转运体atp结合蛋白(abc transporter atp－binding protein)基因而提高了产酶率。本发明是基于上述见解而完成的。

4、根据本发明，提供以下发明。

5、＜1＞一种微生物，其至少1种abc转运体atp结合蛋白的表达丧失或降低。

6、＜2＞根据＜1＞所述的微生物，其中，上述abc转运体atp结合蛋白为具有以下氨基酸序列的蛋白质，该氨基酸序列与序列号2的氨基酸序列具有90％以上的序列同源性。

7、＜3＞根据＜1＞或＜2＞所述的微生物，其为芽孢杆菌属(bacillus)微生物、胞囊杆菌属(cytobacillus)微生物、或者类芽孢杆菌属(paenibacillus)微生物。

8、＜4＞根据＜1＞～＜3＞中的任一项所述的微生物，其为解淀粉芽胞杆菌。

9、＜5＞根据＜1＞～＜4＞中的任一项所述的微生物，其中，通过使至少1种abc转运体atp结合蛋白的表达丧失或降低而使目标蛋白质的表达增大。

10、＜6＞根据＜5＞所述的微生物，其中，目标蛋白质为由内源性基因编码的蛋白质或者由外源基因编码的蛋白质。

11、＜7＞根据＜5＞或＜6＞所述的微生物，其中，目标蛋白质为酶。

12、＜8＞根据＜1＞～＜7＞中的任一项所述的微生物，其中，编码上述abc转运体atp结合蛋白的基因通过同源重组而被破坏。

13、＜9＞一种蛋白质的制造方法，包含：培养＜1＞～＜8＞中的任一项所述的微生物来生成蛋白质的工序、以及回收所得到的蛋白质的工序。

14、根据本发明的微生物，能够提高蛋白质分泌量。

1.一种微生物，其至少1种abc转运体atp结合蛋白的表达丧失或降低。

2.根据权利要求1所述的微生物，其中，所述abc转运体atp结合蛋白为具有以下氨基酸序列的蛋白质，该氨基酸序列与序列号2的氨基酸序列具有90％以上的序列同源性。

3.根据权利要求1或2所述的微生物，其中，所述微生物为芽孢杆菌属微生物、胞囊杆菌属微生物、或者类芽孢杆菌属微生物。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的微生物，其为解淀粉芽孢杆菌。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的微生物，其中，通过至少1种abc转运体atp结合蛋白的表达丧失或降低而使目标蛋白质的表达增大。

6.根据权利要求5所述的微生物，其中，目标蛋白质为由内源性基因编码的蛋白质、或者由外源基因编码的蛋白质。

7.根据权利要求5或6所述的微生物，其中，目标蛋白质为酶。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的微生物，其中，编码所述abc转运体atp结合蛋白的基因通过同源重组而被破坏。

9.一种蛋白质的制造方法，包括：培养权利要求1～8中任一项所述的微生物来生产蛋白质的工序，以及回收所得到的蛋白质的工序。